Completo

Introducción.

La cavidad oral forma parte fundamental de la microbiota humana, en está podemos localizar microorganismos y cientos de especies distintas con intéres odontológico como Streptococcus mutans, Candida Albicans, Staphylococcus Aereus, entre otras. Los microorganismos se pueden alojar en diversas zonas como la lengua, carillos, dientes de manera supragingival o subgingival y tejidos blandos. 1 En el año 2019 comenzó la pandemia ocasionada por el COVID-19 SARS COV2, ocasionando millones de muerte mundialmente, lo que llevó a la creación de diversas vacunas para proteger a la población tales como Pfizer, AstraZeneca, Moderna, CanSino. 2 La microbiota oral repercute de manera negativa en diversas enfermedades sistémicas como es el caso del Alzheimer, Artritis reumatoide.3 La presencia o el aumento de ciertos microorganismos pueden dañar sistémicamente al paciente. El saber los microorganismos presentes dependiendo de la vacuna ayudará a disminuir el factor de riesgo que suponen las bacterias en enfermedades sistémicas.

Metodología

Se tomaron 35 muestras de saliva en pacientes de sexo indistinto residentes del municipio de Tepic, Nayarit que recibieron algún tipo de vacuna contra COVID-19. Posteriormente se seleccionaron 13 de estos pacientes con posible enfermedad periodontal, se realizó el curetaje de algunos órganos dentarios, obteniendo así placa dental subgingival.Se agruparon a los pacientes en dos grupos uno de ellos pacientes con posible enfermedad periodontal y el segundo sin dicha enfermedad. Después se conservaron las muestras en medios de transporte Stuart, para su realización se colocó 250 ml del medio de transporte en un matraz Erlenmeyer de 1000 ml, se calentó esperando la ebullición, agitando el matraz constantemente, dejándolo enfriar a temperatura ambiente, se colocaron 3 ml de la solución en tubos de vidrio, colocandoles un tapón de algodón,se pusieron en una gradilla metálica, se esterilizaron en autoclave de vapor por 30 minutos, dejándolos enfriar a temperatura ambiente. A fin de su conservación se refrigeraron a 5°C hasta el momento de su utilización. Debido a la necesidad de identificar diversos tipos de microorganismos se realizaron los agares necesarios para su adecuado crecimiento. En el caso de bacterias anaerobias los medios de cultivo utilizados fueron hemina y chocolate. El medio de cultivo Hemina Menamiona, se preparó con la base de agar sangre, con los gramos indicados por el fabricante en el envase y se disolvió en 1000ml de agua. Después se calentó hasta ebullición, se aseguró que se disolviera por completo, se tapó y esterilizó por 20 minutos en autoclave. Transcurrido ese tiempo, se dejó enfriar a temperatura ambiente y se le agregaron 100 ml de sangre y se agitó hasta incorporar luego se agregaron 2 ml de vitamina K. Se vaciaron en cajas de petri desechables aproximadamente 25 ml del contenido, se dejó enfriar y se procedió a realizar el control de calidad. Se procedió a realizar el PCR, primero se colocaron las bacterias en un medio acuoso, rico en nutrientes para su crecimiento y se dejó durante 24 horas para su proliferación. Se puso 1.5 ml de caldo bacteriano y se centrifugo a 12,000 revoluciones por dos minutos. Después se resuspendió el sedimento en 180 UL de solución lysis . Más tarde se agregó 20 UL de proteína K la cual previamente fue preparada con agua con los mililitros indicados para el mili gramaje, se incubo a 55°C por 30 minutos. Se añadió 20 ML de solución C, con vortex se mezcló y se metió a incubar a 55°C por 10 minutos. Es importante mencionar que se hizo decantación de la solución para así tener el espacio para el volumen requerido y poder agregar las demás soluciones. Se pusó 500 ML de la solución columna preparada a centrifugar a 12,000 RPM durante 1 minuto, se decantó el flujo. El siguiente paso fue unir el DNA a la columna por lo cual se añadió 500 UL. Se transfirió el ETHOL para mezclar la columna, se centrifugo a 6500 RM por un minuto. Después se lavó la columna con 500 ML de agua, se centrifugó agua, se desechó el sobrante. Se agregó 500 ML de solución de lavado y se centrifugo a 12000 RPM por 3 minutos. Para unir el ADN se transfirió el contenido y se añadió 200 ML de clute ADN centrifugándolo a 6500 por un minuto. Se procedió a realizar el segundo lavado agregando 500 ML de agua el cual previamente fue diluido en ETONOL en la columna y se centrifugo por tres minutos a 12,000 RPM, se puso a secar. Antes de poner el ADN debe estar libre de ETHOL. Después se centrifugo la columna por un minuto a máxima velocidad. Se decantó el contenido del tubo y se colocó la unión de columna en uno nuevo. Para finalizar se preparó una solución de 200 UL de solución (B 6803) en el dentro de la columna y se centrifugo por un minuto < 6500.Para mejorar la eficacia, se incubo por 5 minutos. Se llevó a analizar en fresco al microscopio para confirmar la presencia del ADN. También se hizo la técnica de electroforesis para ver el ADN bacteriano.

Resultados.

La bacteria predominante en todas las muestras fue Escherichia Coli. Se presentó en el 70.5% de las muestras; En relación con los pacientes con enfermedad periodontal la vacuna más aplicada fue una combinación de CanSino y AstraZeneca esta última como refuerzos. Por otro lado, la bacteria aerobia (Gráfica 1.1) que más predomino en la combinación CalSino/AstraZeneca fue el Estreptococo Alfa hemolítico, pero también el Estafilococo Aereus. Además, el Estafiloco Aerus fue el que más apareció en los pacientes con posible enfermedad periodontal. Cabe resaltar que la segunda vacuna más aplicada fue la AstraZeneca en este caso la bacteria aerobia más común fueron los streptococos, pero con diversa hemolisis. Las bacterias anaerobias predominantes fueron Streptoccos Salivarius y Streptoccos Haemolytricus. La combinación Pfizer/CalSino fue la tercera vacuna más colocada, pero no es posible decir la bacteria aerobia más frecuente porque no se tienen datos concluyentes. En el caso de los hongos en general en los pacientes con posible enfermedad periodontal el 53.84% no tuvo presencia de Cándida Albicans. Hay que resaltar que el 75% de los pacientes vacunados con Calsino/AstraZeneca tuvieron presencia de Cándida a diferencia de los vacunados por AstraZeneca con el 66.6%.

Conclusiones

Se observó alteración en la presencia o ausencia de las bacterias de la cavidad bucal, según el tipo de vacuna aplicada.

Palabras clave: Bacterias cavidad oral Covid 19 técnica pcr

2023-06-07   |   126 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 17 Núm.1. Septiembre 2022 Pags. 118-121 Rev Invest Cien Sal 2022; 17((Supl 1))